2aEval. 1. Tinciones negativas y diferenciales

 FUNDAMENTO

Las tinciones negativas son un tipo de tinciones simples en las que el colorante se aplica al campo de observación y no penetra en las células, actuando sólo como para oscurecer el medio circundante, dejando a las células resaltadas y delimitadas en color blanco.

Las tinciones diferenciales tienen como objetivo permitirnos distinguir entre tipos

celulares diferentes o entre distintas estructuras celulares.

PROCEDIMIENTO: Tinción de Gram

Como ya sabemos, las bacterias gram + se manifestarán de color azul y las gram - de color rojo-rosa.

Para esta práctica hemos usado varios cultivos diferentes entre sí:

• Bacterias gram +:

• Staphylococcus epidirmidis 

• Micrococcus luteus

• Bacterias gram -:

• Escherichia coli

• Citrobacter freundii

• Pseudomonas fluorescens

En primer lugar, ponemos una gota de agua en el portaobjetos alrededor del mechero bunsen, en la zona de asepsia.

Esterilizando antes el asa de siembra, recogemos un inóculo del cultivo gram + y extendemos en sentido horizontal en el portaobjetos, después, recogemos un inóculo del cultivo gram - y lo extendemos de manera vertical, mezclando así ambas bacterias. 

Una vez hecha la extensión, procedemos a la tinción de gram:

1. Fijamos la muestra 

2. La dejamos enfriar

3. Vertemos cristal violeta durante 1 minuto

4. Lavamos con H2O destilada

5. Teñimos con lugol dos minutos

6. Lavamos con H2O destilada

7. Lavamos con etanol 30 segundos

8. Lavamos con H2O destilada

9. Teñimos con fucsina dos minutos 

10. Lavamos con H2O destilada

MORFOLOGÍA DE LAS BACTERIAS 

Portas por el orden: 2, 1, 3 y 4

Porta 1: M.Luteus y E.Coli

En este caso, las bacterias gram + se observan en forma de bacilos azules y las bacterias gram + se ven de color rosa y forma cocoide.

Porta 2: E.Coli y S.Epidermidis

Este porta es en que más claramente se ven las bacterias y el que, claramente, mejor se ha hecho. 

En este caso, ambas bacterias tienen forma de bacilo.

Porta 3: M.Luteus y E.Coli

Como se ve claramente, este porta no se ha teñido correctamente, seguramente por un tiempo excesivo con la tinción de fucsina. 

De todos modos, las bacterias tipo coco rosas que se pueden apreciar es E.Coli y las zonas “azuladas” en forma de bastón son las bacterias gramnegativas.

Porta 4: M.Luteus y E.Coli

Como son las mismas bacterias, la morfología es igual que la anterior pero en esta ocasión la tinción se ha realizado correctamente.

OBSERVACIONES 

Material

A la derecha, cultivos gram -, a la izquierda cultivos gram +

Paso 1: Extracción del inóculo

Paso dos: extensión

Paso 3: Tinción

EN ESTA PRÁCTICA (29/11/2022) SÓLO HA DADO TIEMPO HA REALIZAR LA TINCIÓN DIFERENCIAL DE GRAM.